细胞培养“大敌”--支原体

作者：上海中乔新舟生物科技有限公司 2022-07-01T13:25 (访问量:5465)

众所周知，支原体污染一直是细胞培养的“头号敌人”，但是支原体的存在却十分普遍，它的“不请自来”总是让我们措手不及。世界上有近60%的实验室正在遭受支原体污染的困扰，今天就让我们来好好认识这个“刺头”吧！

什么支原体？

支原体结构简单，具有高度多形性、无细胞壁、增殖缓慢、可在人工培养基中存活并增殖的特点。除此之外，它的“个头”很小，只有0.1-0.3um，可通过一般的滤菌器。支原体主要以二分裂方式繁殖，亦可以出芽方式繁殖，分枝形成丝状后断裂呈球杆状颗粒。大部分支原体繁殖速度比细菌慢，适宜生长温度为35℃，最适pH值为7.8～8.0。在固体培养基上培养时，形成典型的“荷包蛋”状菌落。

电镜照片

支原体是如何“欺负”细胞的？

我们知道一株被支原体污染的细胞是无法用来做实验得出准确的实验数据的--一方面是因为支原体本身也是一种原核细胞生物，相当于一种交叉污染；另一方面，细胞感染支原体后，由于支原体大量消耗培养基中的营养和细胞代谢的基础成分，包括核酸前体、氨基酸、维生素、脂质、胆固醇等，导致细胞增殖缓慢及各种代谢、功能紊乱甚至丧失；除此之外，支原体还会吸附在细胞表面，破坏细胞膜的完整性，更有少数类型支原体可进入细胞内，如发酵支原体、生殖支原体和肺炎支原体。

如何“确诊”细胞支原体污染？

支原体污染之所以让广大科研人员头疼，是因为它在普通光学显微镜下难以被发现，并且细胞被污染早期不会表现出明显的“症状”。

一般来说，如果培养过程中细胞增殖突然变慢，培养基中黑点、碎片明显增多，培养基PH变化（变黄）周期变短，那么细胞很可能已经感染了支原体。这时候，就需要使用各种检测手段来确认。目前常用的方法有：DNA染色法，支原体培养法，PCR法（包括凝胶电泳和荧光定量），化学发光法。前两种方法结果可靠，但实验周期长。PCR法原理是在支原体16S rRNA基因的保守区设计引物，通过检测支原体DNA来检测细胞中有无支原体的污染，得到的广泛应用。

“中乔新舟“支原体检测试剂盒（PCR凝胶电泳法）检测结果注：

1号泳道为Maker

2号泳道为检测细胞（结果显示阳性）

3号泳道为阳性对照

4号泳道为阴性对照

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细胞“确诊”支原体污染后怎么办？

如果您的细胞不幸感染了支原体，最最最好的处理方式是立即丢弃该细胞，并对培养箱、超净台等设施及场所进行消毒灭菌。因为支原体的传播非常隐秘，相关研究表明其甚至能通过气溶胶传播。当然，如果您的细胞非常珍贵或者不能再获得，可以尝试使用抑制支原体的药物进行处理，尝试消除支原体污染。能抑制支原体的药物有四环素；大环内酯类药物，如罗红霉素、克拉霉素、阿奇霉素等；喹诺酮类药物，如氧氟沙星、司帕沙星等。

这个过程一般周期较长，因为使用药物处理时需配合多次大比例连续传代来提高成功率。坚持，就是胜利！

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细胞“确诊”支原体污染后怎么办？

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