【产品介绍】
 
SH-SY5Y是一种人神经母细胞瘤细胞系，是神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH的三次克隆(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)的亚系，最初于1970年从一位4岁女孩的骨髓中分离建立的，在形态、生理、生化功能上与人体细胞相似，可以转化为神经元样细胞，并表现出一系列具有高度指导意义的神经生物学特性。广泛应用于神经科学研究，包括神经退行性疾病（如帕金森病和阿尔茨海默病）、神经毒性、神经分化、基因功能研究以及信号传导途径研究等领域。它们可以经过特定的分化方案处理，分化为更接近于成熟神经元的细胞类型。是神经科学研究领域中的一个重要工具，它为科学家们提供了一个模拟人类神经母细胞瘤和神经元在体外条件下行为的模型。据报道，它们表现出中等水平的多巴胺β羟化酶活性。
 
SY5Y的生长特点为大部分贴壁，呈上皮样，有短触角延伸出来，倾向于成簇生长，容易成团，少部分悬浮，圆润有光泽。以下是中乔新舟拍摄的不同倍数的SH-SY5Y细胞图：
 

4X
 

10X
 

20X
 
细胞名称： SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)

细胞别称： SHSY5Y; SHSY-5Y; SH-Sy5y; SK-SH-SY5Y; SY5Y

细胞货号： ZQ0050

生长特性： 混合、贴壁和悬浮（该细胞培养时贴壁细胞与悬浮细胞同时存在，均为正常形态的活细胞）。

培养条件： 43.5% MEM（含NEAA）（中乔新舟货号：ZQ-300）+43.5% F12（中乔新舟货号：ZQ-400）  +10% FBS（中乔新舟货号：ZQ0500）+1% 双抗（中乔新舟货号：CSP006）+1% Sodium Pyruvate（中乔新舟货号：CSP003）+1% L-alanyl-L-glutamine（中乔新舟货号：CSP004）+1% NEAA  (中乔新舟货号：CSP008)；

或者：DMEM (中乔新舟货号：ZQ-100)+10%FBS（中乔新舟货号：ZQ0500）+1%双抗（中乔新舟货号：CSP006）；

完全培养基货号：ZM0050 或ZM0050-B；

培养环境：95%空气，5%CO₂；37℃

【传代培养】

该细胞为半贴壁半悬浮细胞，悬浮细胞是活细胞，可用离心管收集细胞悬液后，于（125g，3 ～5分钟）1000-1200rmp 收集细胞；部分贴壁不牢的细胞可直接吹起使之悬浮；贴壁较牢固的细胞可用PBS 润洗后，在培养瓶中加入 1-2 毫升 0.25% 胰蛋白酶溶液（含EDTA）置于 37℃培养箱中消化，待细胞变圆收缩成流沙状态脱落后可用 4-6 mL 左右完全培养基进行终止消化，轻轻吹散细胞后离心收集细胞；将悬浮的细胞和贴壁的细胞收集到一起混匀后按比例接种到新的培养瓶。
该细胞增殖比较缓慢，容易聚团生长，镜下观察融合率不高，但细胞簇实际密度大，需要5-7天才能达到80%以上的融合率。

【细胞冻存】

1.细胞密度80%以上，活细胞百分率达 95%以上时，将细胞按照以上步骤进行消化收集细胞沉淀进行冻存。
2.细胞沉淀用适量 4 °C 冻存液（货号：CSP042）重悬， 建议一瓶 T25 细胞冻存一管（1ml/管），直接将分装好的细胞冻存管置于-80℃超低温冰箱中过夜，若需液氮长期保存，需先置于-80℃至少一天后方可转至液氮罐中。

NOTE:若不是我司冻存液请按照冻存液说明书操作，若是自配冻存液需梯度降温冻存(2-8℃ , 放置 40min:-20℃,放置 30min-60min， -80℃放置一天后转移至液氮保存)或使用程序降温盒降温后，再转移至液氮中保存。

【细胞复苏】

1.液氮取出的细胞放入干冰中转移到细胞房，提前准备好完全培养基，离心管。
2.冻管细胞在 37 °C 水浴中迅速解冻（大约 1-2 分钟）。为了减少污染的可能性，保持冻管瓶盖在水浴液面之上。 一旦大部分内容物解冻，立即将冻管移出水浴，70%的乙醇消毒冻管外壁。
3.将内容物转移到含 3-6mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀，离心（125 g，3 ～5 分钟）1000-1200rmp去除培养基， 细胞沉淀用手指弹松，添加3ml完全培养基混匀细胞并进行计数，用适量完全培养基将细胞密度调整至 0.6-2.0X10⁵ ，转移至培养瓶中，于培养箱中静置培养。建议 T25 培养瓶添加 5-7ml 完全培养基。当密度达到 80%以上时传代。

【常见问题】

细胞状态差如何调整？

培养基和血清：确保使用正确的基础培养基和加入适量血清，血清浓度可根据细胞状态适当调整。避免使用过期或长时间存放的培养基，新鲜配制的完全培养基建议在两周内使用完毕。
细胞培养环境：确认培养温度、湿度、气相条件是否正常。
细胞传代操作：细胞传代时，注意消化时间和胰酶浓度，避免因消化时间过长或过短导致的细胞损伤。

细胞结团如何调整？

调整细胞密度
控制接种密度：控制接种密度不要过高，以减少细胞聚集成团的机会。一般建议细胞密度达到80%左右进行传代。
低密度传代：可以尝试低密度传代，即减少每次传代的细胞数量，这有助于细胞在培养瓶中更均匀地分布。
优化培养条件
培养基选择：确保使用正确的SH-SY5Y细胞生长的培养基，并根据需要调整培养基的成分，如血清浓度等；
确保培养环境适宜，如稳定的温度、湿度和CO₂浓度等。
注意消化操作
延长消化时间：如果细胞结团是由于消化不充分引起的，可以适当延长消化时间，但要避免过度消化导致细胞损伤。
轻柔吹打：在消化过程中和传代时，用移液枪或吸管轻柔地吹打细胞悬液，以分散细胞团块。注意吹打力度要适中，避免产生气泡。

预防成团的方法：

1、控制细胞密度不超过80%，当密度到达或超过80%及时传代；传代时切勿暴力吹打，避免对细胞造成机械刺激。
2、使用质量好的细胞培养基和胎牛血清，减少内毒素等有害物质对细胞的刺激。
3、请勿频繁把细胞从培养箱拿出，气温低时需开暖气维持细胞房温度；使用PBS、培养基前37 °C预热，以避免温差对细胞造成刺激。

【注意事项】

1、SH-SY5Y细胞以悬浮细胞和贴壁细胞的混合形态生长。贴壁细胞生长成具有多个短而细的细胞突起(神经突)的神经母细胞簇。细胞在生长过程中会聚集，形成团块可能会粘附底部或漂浮。这些细胞均为活细胞。如果在培养过程中发现绝大部分细胞呈现贴壁状态，很少有悬浮的活细胞，这是正常情况。我们建议用户按照贴壁细胞的方式进行消化和培养。
2、如果细胞培养生长过程呈现为混合形态，细胞传代时先将悬浮细胞离心收集。然后将贴壁细胞及聚团细胞用新鲜胰酶溶液冲洗一遍， 再加入1-2ml胰酶溶液，消化约5分钟左右使得细胞分离变圆后加入新鲜的培养基后离心收集重悬，同时合并收集的悬浮细胞悬液，传至新的培养瓶中。如果培养过程中发现悬浮的细胞数量比较多，或者细胞虽然为贴壁状态但容易聚团且生长缓慢，则需要在换液和传代时通过离心收集这些悬浮细胞，并且尽快更换高质量的血清以促进细胞贴壁和生长。
3、细胞对血清质量较为敏感，建议您使用优质胎牛血清进行培养或选择订购中乔新舟含配套SH-SY5Y细胞完全培养液。
4、容易聚团，消化后静置10min去除大块沉淀收集上清离心重铺。
5、细胞传代时比例不宜太高，培养密度不宜太低，一般1:2或1:3传代较为合适，培养密度越低增殖速度越慢； 细胞生长过多时会堆在一起并逐渐脱落，需要在脱落前及时传代；一些细胞团在传代时需要吹散，吹打力度需适中； 细胞密度越高，培养基消耗越快，注意及时换液或传代。