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过氧化氢酶（Catalase，CAT）试剂盒说明书
测定意义：
CAT 是最主要的H2O2 清除酶，在活性氧清除系统中具有重要作用。
测定原理：
H2O2 在240nm 下有特征吸收峰，CAT 能够分解H2O2，使反应溶液240nm 下的吸光度随反
应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT 活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：100 uL×3 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备
收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200 万细菌或细胞加入400μL 提取
液的比例充分匀浆以破碎并裂解细胞；8000g4℃离心10 分钟，取上清，置冰上待测。
称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10 分钟，取上清，置
冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
测定步骤：
1、CAT 检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二（100 uL）中加入20mL 试剂一，充分混匀，
作为工作液。
2、测定前将CAT 检测工作液室温放置，使之温度不低于室温。
3、取1mLCAT 检测工作液于1mL 石英比色皿中，再加入35μL 粗酶液，混匀；室温下立即
测定240nm 下的初始吸光值A1 和1min 后的吸光值A2。
CAT 活性计算：
1、血清（浆）CAT 活力的计算:
单位的定义：每升血清（浆）在反应体系中每分钟催化1umol H2O2 降解定义为一个酶活力
单位。
CAT（U/L）＝750×（A1－A2）
2、组织CAT 活力计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力
单位。
CAT（U/mg prot）＝750×（A1－A2）÷蛋白质浓度（mg/mL）
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g 组织在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT（U/g mass）＝750×（A1－A2）÷样品质量（g/L）
3、细菌或细胞中CAT 活力计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：PH7.0 条件下，每mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义
为一个酶活力单位。
CAT（U/mg prot）＝750×（A1－A2）÷蛋白质浓度（mg/mL）
3.2 按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶
活力单位。
CAT（U/104 cell）＝750×（A1－A2）÷细胞密度（104 cell /mL）

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